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色譜分離法的類型及基本原理

發(fā)布時(shí)間：2023-04-22 08:59:37 稿源：創(chuàng)意嶺閱讀： 141

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本文目錄:

1、液相色譜法的原理和分類
2、色譜法的分類
3、色譜分離技術(shù)的色譜種類
4、簡(jiǎn)述色譜法的四種原理機(jī)制

色譜分離法的類型及基本原理

一、液相色譜法的原理和分類

液相色譜法的分離機(jī)理是基于混合物中各組分對(duì)兩相親和力的差別。根據(jù)固定相的不同，液相色譜分為液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜。應(yīng)用最廣的是以硅膠為填料的液固色譜和以微硅膠為基質(zhì)的鍵合相色譜。根據(jù)固定相的形式，液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法及薄層色譜法。按吸附力可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠滲透色譜。近年來，在液相柱色譜系統(tǒng)中加上高壓液流系統(tǒng)，使流動(dòng)相在高壓下快速流動(dòng)，以提高分離效果，因此出現(xiàn)了高效（又稱高壓）液相色譜法。采用柱色譜技術(shù)的一種高效液相色譜法，樣品展開方式采用洗脫法。根據(jù)不同的分離方式，離子色譜可以分為高效離子色譜、離子排斥色譜和流動(dòng)相離子色譜3類。高效離子色譜法使用低容量的離子交換樹脂，分離機(jī)理主要是離子交換。離子排斥色譜法用高容量的樹脂，分離機(jī)理主要是利用離子排斥原理。流動(dòng)相離子色譜用不含離子交換基團(tuán)的多孔樹脂，分離機(jī)理主要是基于吸附和離子對(duì)的形成。

離子色譜儀由淋洗液貯存器、泵、進(jìn)樣閥、分離柱、抑制柱、電導(dǎo)檢導(dǎo)器和數(shù)據(jù)處理單元等組成。離子色譜儀最重要的部件是分離柱，裝有離子交換樹脂。抑制柱是抑制型離子色譜儀的關(guān)鍵部件，其作用是將淋洗液轉(zhuǎn)變成低電導(dǎo)部分，以降低來自淋洗液的背景電導(dǎo)，同時(shí)將樣品離子轉(zhuǎn)變成其相應(yīng)的酸或堿，以增加其電導(dǎo)。分離陰離子，抑制柱填充強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂；分離陽離子，抑制柱填充強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂。檢測(cè)器分通用型檢測(cè)器與專用型檢測(cè)器。前者如電導(dǎo)檢測(cè)器，對(duì)檢測(cè)池中所有離子都有響應(yīng)；后者如紫外-可見分光光度計(jì)，對(duì)離子具有選擇性響應(yīng)。離子對(duì)色譜法是將一種（或數(shù)種）與樣品離子電荷（A+）相反的離子（B-，稱為對(duì)離子或反離子，Counterion）加入到色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相（或固定相）中，使其與樣品離子結(jié)合生成弱極性的離子對(duì)（呈中性締合物）。此離子對(duì)不易在水中離解而迅速進(jìn)入有機(jī)相中，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。

色譜分離法的類型及基本原理

二、色譜法的分類

以下是色譜法的分類及原理：

按兩相狀態(tài)分類。以氣體為流動(dòng)相的色譜法稱為氣相色譜法(GC)。根據(jù)固定相是固體吸附劑還是固定液(附著在悟性載體上的薄層有機(jī)化合物液體),氣相色譜法又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)。以液體為流動(dòng)相的色譜法稱為液相色譜法(LC)。同理,液相色譜法也可再分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。

色譜分離法的類型及基本原理

按分離機(jī)理分類。利用組分在吸附劑(固定相)上的吸附能力強(qiáng)弱不同而進(jìn)行分離的方法,稱為吸附色譜法。利用組分在固定液(固定相)中溶解度不同而進(jìn)行分離的方法稱為分配色譜法。利用組分在離子交換劑(固定相)上的親和力大小不同而進(jìn)行分離的方法,稱為離子交換色譜法。

利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇滲透而進(jìn)行分離的方法,稱為凝膠色譜法或尺寸排阻色譜法。最近,又有一種新分離技術(shù),是利用不同組分與固定相(固定化分子)的高專屬性親和力來進(jìn)行分離,稱為親和色譜法,常用于蛋白質(zhì)的分離。

色譜分離法的類型及基本原理

按固定相使用的外形分類。固定相裝于柱內(nèi)的色譜法,稱為柱色譜法,板狀的色譜法,稱為平板色譜,它又可分為薄層色譜法和紙色譜法

三、色譜分離技術(shù)的色譜種類

色譜有多種，按固定相類型和分離原理可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、親和色譜、大孔吸附樹脂、凝膠色譜、聚焦色譜等。最常用的是吸附色譜分離技術(shù)。

吸附色譜法是指混合物隨流動(dòng)相通過吸附劑（固定相）時(shí)，由于吸附劑對(duì)不同物質(zhì)具有不同的吸附力而使混合物中各組分分離的方法。此法特別適用于脂溶性成分的分離。被分離的物質(zhì)與吸附劑、洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析的三要素，彼此緊密相連。

色譜分離法的類型及基本原理

四、簡(jiǎn)述色譜法的四種原理機(jī)制

色譜法的原理是待分離物質(zhì)分子在固定相和流動(dòng)相之間分配平衡的過程，不同的物質(zhì)在兩相之間的分配會(huì)不同，這使其隨流動(dòng)相運(yùn)動(dòng)速度各不相同，隨著流動(dòng)相的運(yùn)動(dòng)，混合物中的不同組分在固定相上相互分離。根據(jù)物質(zhì)的分離機(jī)制，又可以分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等類別。

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