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色譜法根據(jù)分離原理可分為
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本文目錄:
一、色譜分離技術(shù)的色譜種類
色譜有多種,按固定相類型和分離原理可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、親和色譜、大孔吸附樹(shù)脂、凝膠色譜、聚焦色譜等。最常用的是吸附色譜分離技術(shù)。
吸附色譜法是指混合物隨流動(dòng)相通過(guò)吸附劑(固定相)時(shí),由于吸附劑對(duì)不同物質(zhì)具有不同的吸附力而使混合物中各組分分離的方法。此法特別適用于脂溶性成分的分離。被分離的物質(zhì)與吸附劑、洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析的三要素,彼此緊密相連。
二、色譜法可以按照什么來(lái)分類?
按色譜法分離所依據(jù)的物理或物理化學(xué)性質(zhì)的不同,又可將其分為5類,分別是:
1、吸附色譜法:利用吸附劑表面對(duì)不同組分物理吸附性能的差別而使之分離的色譜法稱為吸附色譜法。適于分離不同種類的化合物(例如,分離醇類與芳香烴)。
2、分配色譜法:利用固定液對(duì)不同組分分配性能的差別而使之分離的色譜法稱為分配色譜法。
3、離子交換色譜法:利用離子交換原理和液相色譜技術(shù)的結(jié)合來(lái)測(cè)定溶液中陽(yáng)離子和陰離子的一種分離分析方法,利用被分離組分與固定相之間發(fā)生離子交換的能力差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。
離子交換色譜主要是用來(lái)分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應(yīng)用于無(wú)機(jī)離子的分離,而且廣泛地應(yīng)用于有機(jī)和生物物質(zhì),如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等的分離。
4、尺寸排阻色譜法:是按分子大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法,體積大的分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻,較早的淋洗出來(lái);中等體積的分子部分滲透;
小分子可完全滲透入內(nèi),最后洗出色譜柱。這樣,樣品分子基本按其分子大小先后排阻,從柱中流出。被廣泛應(yīng)用于大分子分級(jí),即用來(lái)分析大分子物質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的分布。
5、親和色譜法:相互間具有高度特異親和性的二種物質(zhì)之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質(zhì)分離的色譜法。例如利用酶與基質(zhì)(或抑制劑)、抗原與抗體,激素與受體、外源凝集素與多糖類及核酸的堿基對(duì)等之間的專一的相互作用;
使相互作用物質(zhì)之一方與不溶性擔(dān)體形成共價(jià)結(jié)合化合物,用來(lái)作為層析用固定相,將另一方從復(fù)雜的混合物中選擇可逆地截獲,達(dá)到純化的目的。可用于分離活體高分子物質(zhì)、過(guò)濾性病毒及細(xì)胞?;蛴糜趯?duì)特異的相互作用進(jìn)行研究。
其應(yīng)用:
色譜法的應(yīng)用可以根據(jù)目的分為制備性色譜和分析性色譜兩大類。
制備性色譜的目的是分離混合物,獲得一定數(shù)量的純凈組分,這包括對(duì)有機(jī)合成產(chǎn)物的純化、天然產(chǎn)物的分離純化以及去離子水的制備等。
相對(duì)于色譜法出現(xiàn)之前的純化分離技術(shù)如重結(jié)晶,色譜法能夠在一步操作之內(nèi)完成對(duì)混合物的分離,但是色譜法分離純化的產(chǎn)量有限,只適合于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。
分析性色譜的目的是定量或者定性測(cè)定混合物中各組分的性質(zhì)和含量。定性的分析性色譜有薄層色譜、紙色譜等,定量的分析性色譜有氣相色譜、高效液相色譜等。色譜法應(yīng)用于分析領(lǐng)域使得分離和測(cè)定的過(guò)程合二為一,降低了混合物分析的難度縮短了分析的周期,是比較主流的分析方法。
在中華人民共和國(guó)藥典中,共有超過(guò)約600種化學(xué)合成藥和超過(guò)約400種中藥的質(zhì)量控制應(yīng)用了高效液相色譜的方法。
三、簡(jiǎn)述色譜法的四種原理機(jī)制
色譜法的原理是待分離物質(zhì)分子在固定相和流動(dòng)相之間分配平衡的過(guò)程,不同的物質(zhì)在兩相之間的分配會(huì)不同,這使其隨流動(dòng)相運(yùn)動(dòng)速度各不相同,隨著流動(dòng)相的運(yùn)動(dòng),混合物中的不同組分在固定相上相互分離。根據(jù)物質(zhì)的分離機(jī)制,又可以分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等類別。
四、色譜法分離是根據(jù)什么原理進(jìn)行的
色譜分離法;chromatographic
separation
在工業(yè)上應(yīng)用色譜分析原理分離性質(zhì)近似組分的方法。使溶液分批通過(guò)垂直的填充吸附劑固定床,將各種組分分離精制。色譜柱內(nèi)的填充吸附劑是多孔的惰性固體,用非揮發(fā)性的惰性液體涂漬。被分離溶液的溶質(zhì)與惰性液體有大小不同的溶解度。如果被吸附的物質(zhì)是氣體,發(fā)生“吸收”現(xiàn)象。如果被吸附的物質(zhì)是液體,發(fā)生“萃取”現(xiàn)象。分離系數(shù)取數(shù)聚決于分配系數(shù)的大小。常用的操作法有:(1)迎頭分離法,當(dāng)溶液連續(xù)通入吸附固定床時(shí),溶液中諸組分因吸附能力大小不同,可順序地由固定床另一端排出;(2)沖洗分離法,在送入溶液的同時(shí),通入不被吸附的載體,可順序地被吸附和解吸,然后以一定的間隔隔離開(kāi);(3)頂替分離法,在載氣中加入吸附能力最強(qiáng)的組分,使依次頂替被吸附的諸組分。色譜分離除已在分析技術(shù)中廣泛應(yīng)用外,也已在化工、冶金和環(huán)保等領(lǐng)域中加以利用。
色譜的分離原理都是利用待測(cè)物質(zhì)在流動(dòng)相和固定相兩相間的分配系數(shù)的不同而實(shí)現(xiàn)分離.
對(duì)于氣液色譜來(lái)說(shuō),分離原理是利用不同物質(zhì)在流動(dòng)相以及固定液中的分配系數(shù)(溶解度)不同而實(shí)現(xiàn)分離;當(dāng)流動(dòng)相流動(dòng)時(shí),流動(dòng)相是溶解性相近的惰性氣體,而固定相的溶解性隨固定液的不同而不同,所以分配系數(shù)主要決定于固定液的性質(zhì)。
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