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內(nèi)參cq值一般多少合適（內(nèi)參gapdhct值多大比較好）

發(fā)布時(shí)間：2023-04-22 07:29:17 稿源：創(chuàng)意嶺閱讀： 105

大家好！今天讓創(chuàng)意嶺的小編來(lái)大家介紹下關(guān)于內(nèi)參cq值一般多少合適的問(wèn)題，以下是小編對(duì)此問(wèn)題的歸納整理，讓我們一起來(lái)看看吧。

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本文目錄:

1、qRT-PCR檢測(cè)植物miRNA的表達(dá)量，內(nèi)參基因選擇什么最好？可以給出特意反轉(zhuǎn)錄引物和qRT-PCR的引物嗎？
2、熒光PCR時(shí)ct值大于30？
3、小鼠14-3-3 zeta的內(nèi)參基因選什么
4、cq值高應(yīng)該降低模版濃度嗎

內(nèi)參cq值一般多少合適（內(nèi)參gapdhct值多大比較好）

一、qRT-PCR檢測(cè)植物miRNA的表達(dá)量，內(nèi)參基因選擇什么最好？可以給出特意反轉(zhuǎn)錄引物和qRT-PCR的引物嗎？

我知道和使用過(guò)的U6內(nèi)參基因只有兩個(gè)： RNU6-1和RNU6-2.前一個(gè)就是常見的u6，后一個(gè)有時(shí)被稱為u6b. 在我的大鼠RNA樣本當(dāng)中，u6表達(dá)量有些太高，u6b的Cq值與我的目標(biāo)miRNA比較接近，穩(wěn)定性也很好。但是這些對(duì)植物樣本中的內(nèi)參基因選擇沒有什么指導(dǎo)意義。

為了確定u6在植物中的保守性，比較快捷的辦法是找到談?wù)撨@個(gè)話題的文獻(xiàn)綜述。如果沒有人寫過(guò)這樣的綜述的話，就只能靠自己去數(shù)據(jù)庫(kù)找到所有序列自己對(duì)比了。

關(guān)于內(nèi)參基因的選擇，必須實(shí)驗(yàn)確定特定樣本中的表達(dá)水平穩(wěn)定，其他文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)的內(nèi)參基因不一定適合你的樣本。做新的課題時(shí)，選擇內(nèi)參基因一般是選取3-5個(gè)常用的，PCR測(cè)試后選取。

這里有applied biosystem一篇非常好的文章討論內(nèi)參基因，里面有很多建議和備選，但都是人和小鼠中測(cè)試的。我貼鏈接不方便，麻煩你自己把點(diǎn)和斜換成標(biāo)點(diǎn)以后使用：

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以上公司的miR PCR是莖環(huán)法，也是我使用過(guò)的，兩個(gè)引物不在同一個(gè)管內(nèi)，兩個(gè)步驟也是完全分開先后進(jìn)行的。暫時(shí)沒有看到他們有內(nèi)參和目標(biāo)基因在同一反應(yīng)管進(jìn)行的miR PCR產(chǎn)品，因?yàn)樗麄兊腜CR探針都用的同一種熒光。如果樓主感興趣RT-PCR一步反應(yīng)的，并且內(nèi)參能夠與目標(biāo)miR在同一反應(yīng)體系進(jìn)行的產(chǎn)品，還要去咨詢各大廠商。

二、熒光PCR時(shí)ct值大于30？

看了你空間里的溶解曲線，你可以看到溶解峰的溫度都很低，全在80以下，你擴(kuò)出來(lái)的東西多半只是引物，你跑定量的時(shí)候有做NTC的孔嗎，如果有做，可以對(duì)照NTC組和加了模板的組，溶解峰還是一樣的話，那你擴(kuò)出來(lái)的產(chǎn)物100%是引物了。

再有，你的擴(kuò)增曲線問(wèn)題，CT太了，一般做定量認(rèn)為CT=25時(shí)，是一個(gè)模板擴(kuò)出來(lái)的，所以當(dāng)大于25擴(kuò)出來(lái)的結(jié)果都不可信。

還有，你反轉(zhuǎn)錄的時(shí)候RNA加多少，2微克？，反轉(zhuǎn)錄體系是多少,20微升？反轉(zhuǎn)錄之后按照多少比例稀釋，1比4？

總之，問(wèn)題可以再問(wèn)詳細(xì)一點(diǎn)，也可以直接HI我

如果做過(guò)NTC那溶解峰就沒問(wèn)題了，而且都很單一，特異性蠻好的。沒稀釋的cDNA做的定量，CT大于30？你P的什么基因呢，表達(dá)量也太低了吧，內(nèi)參的CT呢，也是這么低嗎

三、小鼠14-3-3 zeta的內(nèi)參基因選什么

我知道和使用過(guò)的U6內(nèi)參基因只有兩個(gè)：RNU6-1和RNU6-2.前一個(gè)就是常見的u6,后一個(gè)有時(shí)被稱為u6b.在我的大鼠RNA樣本當(dāng)中,u6表達(dá)量有些太高,u6b的Cq值與我的目標(biāo)miRNA比較接近,穩(wěn)定性也很好.但是這些對(duì)植物樣本中的內(nèi)參基因選擇沒有什么指導(dǎo)意義.

為了確定u6在植物中的保守性,比較快捷的辦法是找到談?wù)撨@個(gè)話題的文獻(xiàn)綜述.如果沒有人寫過(guò)這樣的綜述的話,就只能靠自己去數(shù)據(jù)庫(kù)找到所有序列自己對(duì)比了.

關(guān)于內(nèi)參基因的選擇,必須實(shí)驗(yàn)確定特定樣本中的表達(dá)水平穩(wěn)定,其他文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)的內(nèi)參基因不一定適合你的樣本.做新的課題時(shí),選擇內(nèi)參基因一般是選取3-5個(gè)常用的,PCR測(cè)試后選取.

這里有applied biosystem一篇非常好的文章討論內(nèi)參基因,里面有很多建議和備選,但都是人和小鼠中測(cè)試的.我貼鏈接不方便,麻煩你自己把點(diǎn)和斜換成標(biāo)點(diǎn)以后使用：

www3點(diǎn)appliedbiosystems點(diǎn)com斜cms斜groups斜mcb_marketing斜documents斜generaldocuments斜cms_044972點(diǎn)pdf

以上公司的miR PCR是莖環(huán)法,也是我使用過(guò)的,兩個(gè)引物不在同一個(gè)管內(nèi),兩個(gè)步驟也是完全分開先后進(jìn)行的.暫時(shí)沒有看到他們有內(nèi)參和目標(biāo)基因在同一反應(yīng)管進(jìn)行的miR PCR產(chǎn)品,因?yàn)樗麄兊腜CR探針都用的同一種熒光.如果樓主感興趣RT-PCR一步反應(yīng)的,并且內(nèi)參能夠與目標(biāo)miR在同一反應(yīng)體系進(jìn)行的產(chǎn)品,還要去咨詢各大廠商.

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四、cq值高應(yīng)該降低模版濃度嗎

應(yīng)該的，cq值高應(yīng)該降低模版濃度的，因?yàn)閏q值高降低模版濃度是正常的，也是必須的，所以cq值高應(yīng)該降低模版濃度

以上就是關(guān)于內(nèi)參cq值一般多少合適相關(guān)問(wèn)題的回答。希望能幫到你，如有更多相關(guān)問(wèn)題，您也可以聯(lián)系我們的客服進(jìn)行咨詢，客服也會(huì)為您講解更多精彩的知識(shí)和內(nèi)容。